Виявлення та ідентифікація бактерій Cronobacter SPP. (Sakazakii) методом полімеразної ланцюгової реакції

Abstract

В статті наведено результати досліджень, які вперше проведені в Україні щодо можливості ідентифікації бактерій Cronobacter spp. (sakazakii) методом полімеразної ланцюгової реакції, з використанням гену 16SrRNA. Ізоляти бактерій Cronobacter spp. (sakazakii) були виділені з сирого молока та об’єктів молочних ферм Сумської області. Серед виділених ізолятів, було вибрано 25 які мали подібні морфологічні, культуральні та біохімічні властивості для проведення ПЛР. В результаті проведеного пошуку та аналізу послідовностей генів з консервативними та варіабельними ділянками у бактерій Cronobacter spp. (sakazakii), були розроблені кілька пар олігонуклеотидних праймерів, специфічних різним ділянкам гена 16SrRNA. При використанні цих праймерів в ПЛР з ДНК виділених ізолятів були отримані попередні позитивні результати з 20 ізолятами бактерій Cronobacter spp. (sakazakii). Згідно отриманих даних, достовірна ідентифікація Cronobacterspp.(sakazakii) на даний час можлива лише за умови використання комплексного підходу, що базується на комбінуванні класичних методів дослідження (мікроскопія, культуральні і біохімічні характеристики) з молекулярно-генетичними. В статье представлены результаты исследований, которые впервые проведенные в Украине относительно возможности идентификации бактерий Cronobacter spp. (sakazakii) методом полимеразной цепной реакции с использованием гена 16SrRNA. Изоляты бактерий Cronobacter spp. (sakazakii) были выделены из сырого молока и объектов молочных ферм Сумской области. Среди выделенных изолятов, было выбрано 25 имевших характерные морфологические, культуральные и биохимические свойства для проведения ПЦР. После поиска и анализа последовательностей генов с консервативными и вариабельными участками у бактерий Cronobacter spp. (sakazakii), были разработаны несколько пар олигонуклеотидных праймеров, специфических различным участкам гена 16SrRNA. При использовании этих праймеров в ПЦР с ДНК выделенных изолятов были получены предварительные положительные результаты с 20 изолятами бактерий Cronobacter spp. (sakazakii). Согласно полученным данным, достоверная идентификация Cronobacter spp. (sakazakii) в настоящее время возможна только при использовании комплексного подхода, основанного на комбинировании классических методов исследования (микроскопия, культуральные и биохимические характеристики) с молекулярно-генетическими.